સેલ સંસ્કૃતિઓના ક્રિઓપ્રિઝર્વેશન માટે મૂળભૂત ટીપ્સ

સેલ સંસ્કૃતિઓના ક્રિઓપ્રિઝર્વેશન માટે મૂળભૂત ટીપ્સ

કોષો સામાન્ય વૃદ્ધિ પ્રવૃત્તિઓ દરમિયાન તેમના ચયાપચયને ચાલુ રાખે છે, જેમાં વિવિધ પ્રોટીઝની ભાગીદારીની જરૂર હોય છે. જ્યારે તાપમાન -70 ° સે નીચે આવે છે, ત્યારે પ્રોટીસ કામ કરવાનું બંધ કરે છે. તેથી, અત્યંત નીચા તાપમાનવાળા વાતાવરણમાં, કોષો તેમની મેટાબોલિક પ્રવૃત્તિઓ રોકી શકે છે અને નિષ્ક્રિય સ્થિતિમાં પ્રવેશ કરી શકે છે જે લાંબા ગાળાના સંગ્રહને મંજૂરી આપે છે.

1. પ્રાયોગિક સામગ્રી

આધાર સામગ્રી:

મૂળ સંસ્કૃતિ માધ્યમ

સીરમ (પરંપરાગત એફબીએસ/એનબી)

અલ્ટ્રેપ્યુર વર્કબેંચ

જંતુરહિત ડાયમેથિલ સલ્ફોક્સાઇડ (ડીએમએસઓ)

જંતુરહિત પીબીએસ ફોસ્ફેટ બફર મીઠું સોલ્યુશન

વાળીને લગતી બંદૂક

વીજળીપૂદ બંદૂક

પ્રયોગોની તૈયારી

એ) ઠંડક સોલ્યુશનની તૈયારી:

સામાન્ય કોષો: 55% બેસલ માધ્યમ + 40% બોવાઇન સીરમ (એફબીએસ/એનબી) + 5% ડીએમએસઓ

મહત્વપૂર્ણ કોષો: 90% બોવાઇન સીરમ (એફબીએસ/એનબી) + 10% ડીએમએસઓ

તૈયાર કરાયેલ ક્રિઓપ્રિસર્વેશન સોલ્યુશનને 15 મિલી સેન્ટ્રીફ્યુજ ટ્યુબ [માળો] માં અને પછીના ઉપયોગ માટે 4 ° સે પર સ્ટોર કરો.

(બી) સ્થિર થવાની કોષોની તૈયારી:

કોષોને ઠંડું પાડતા પહેલા, સારી વૃદ્ધિની સ્થિતિ અને લોગરીધમિક વૃદ્ધિના તબક્કામાં કોષો પસંદ કરો અને કોષની સ્થિતિ જાળવવા માટે ઠંડક પહેલાં 12-24 કલાક પહેલા તાજી માધ્યમથી તેમને બદલો.

2. પ્રાયોગિક પ્રક્રિયા

1. કોષોની ઘનતાનું અવલોકન કરો, જે લગભગ 80%~ 90%છે. જૂના માધ્યમની મહત્વાકાંક્ષા માટે પાઇપેટ બંદૂકનો ઉપયોગ કરો, કોષોને 1-2 વખત ધોવા માટે જંતુરહિત પીબીએસ ઉમેરો અને સંસ્કૃતિના વાતાવરણમાં બાકીના માધ્યમને દૂર કરો.

2. ટ્રાઇપ્સિનને કોષોમાં પ્રવેશવા માટે, અને પાચન માટે ઇન્ક્યુબેટરમાં મૂકવા માટે ટ્રાઇપ્સિન અથવા પાચક રસની યોગ્ય માત્રા ઉમેરો. માઇક્રોસ્કોપ હેઠળના કોષોની સ્થિતિનું અવલોકન કરો: સાયટોપ્લાઝમ પાછો ખેંચી રહ્યો છે અને કોષો હવે ચાદરોમાં જોડાયેલા નથી. આ બિંદુએ, પાચન પ્રક્રિયાને રોકવા માટે સ્ટોપ સોલ્યુશન ઉમેરો.

3. સેલ સસ્પેન્શનની રચના કરવા અને સેલ સસ્પેન્શનને 3-5 મિનિટ માટે 1000 આરપીએમ પર સેન્ટ્રીફ્યુજ કરવા માટે મદદથી કોષોને નરમાશથી બબલ કરો.

સુપરનેટન્ટને કા discard ી નાખો, સ્થિર સોલ્યુશનની યોગ્ય માત્રા ઉમેરો, અને કોષોને સમાનરૂપે ગણવા માટે નરમાશથી પાઇપેટ કરો. અંતિમ ઘનતા 5 × 106/મિલી ~ 1 × 107/મિલી બનાવવા માટે ક્રિઓપ્રિસર્વેશન માધ્યમ સાથે સેલની ઘનતાને સમાયોજિત કરો.

The. અપેક્ષિત ક્ષમતા અનુસાર ક્રાયોજેનિક ટ્યુબ્સને અલગ કરવા માટે પાઇપેટ ગનનો ઉપયોગ કરો અને કેપ અને સીલ માટે સ્વચાલિત કેપીંગ મશીનનો ઉપયોગ કરો.

5. સ્ટાન્ડર્ડ ક્રિઓપ્રિઝર્વેશન પ્રોગ્રામ એ -1 ° સે થી -2 ° સે/મિનિટનો ઠંડક દર છે, અને સ્થિર થવાના કોષો નીચેના પગલાઓ અનુસાર ધીમે ધીમે સ્થિર થઈ શકે છે: ઓરડાના તાપમાને → 4 ° સે (20 મિનિટ) → - 20 ° સે (30 મિનિટ) 80 -80 ° સે ° સે (રાતોરાત) lic પ્રવાહી નાઇટ્રોજનમાં લાંબા ગાળાના સંગ્રહ.

તે રાતોરાત -80 ° સે પર સીધા ફ્રીઝરમાં પણ સંગ્રહિત કરી શકાય છે અને પછી સ્ટોરેજ માટે પ્રવાહી નાઇટ્રોજનમાં સ્થાનાંતરિત થઈ શકે છે.

યોંગ્યુ મેડિકલ એ એક ઉચ્ચ તકનીકી એન્ટરપ્રાઇઝ છે જે આર એન્ડ ડી, બાયોમેડિકલ ઉપભોક્તાઓના ઉત્પાદન અને વેચાણમાં વિશેષતા ધરાવે છે. પાઇપેટ ટીપ્સ, પીપેટ્સ, પીસીઆર પ્લેટ, સેલ કલ્ચર પ્રોડક્ટ્સ અને અન્ય જૈવિક પ્રયોગશાળા ઉપભોક્તા. યોંગ્યુ મેડિકલ તમારા વિશ્વાસ અને પસંદગી માટે યોગ્ય છે! સલાહ માટે આપનું સ્વાગત છે!